無細胞蛋白表達試劑盒是一種用于在離體條件下合成蛋白質的工具,在科研和工業領域具有廣泛應用。該試劑盒的核心原理是利用無細胞蛋白表達系統,在體外模擬細胞內的蛋白質合成過程。它通常包含細胞提取物、能量源、氨基酸、輔因子等必要組分,以及核酸模板(如質粒DNA、線性DNA或mRNA)。通過加入目標蛋白質的編碼模板,試劑盒可以在短時間內實現高效的蛋白質合成。
無細胞蛋白表達試劑盒具有諸多優勢。首先,它操作簡便,只需加入模板、提取物和底物即可開始表達,像做PCR一樣簡單。其次,表達快速,通常只需2-4小時即可完成實驗。再者,它具有高普適性,能突破傳統細胞內表達的極限,實現大分子蛋白、毒蛋白、膜蛋白及不溶蛋白的表達,表達量可達3mg/ml反應體系。此外,試劑盒的自由度高,可根據需求添加蛋白酶抑制劑、稀有密碼子、金屬離子等添加劑,或進行tRNA修飾和氨基酸標記等,還能進行多個模板的同時表達,表達出的多個蛋白自動組裝。
1、低溫保存
大多數無細胞蛋白表達試劑盒需要低溫保存,通常為-20℃或-80℃。
具體溫度要求需參考試劑盒說明書,避免因溫度過高導致蛋白或酶失活。
2、避免反復凍融
反復凍融會破壞試劑中的蛋白質、酶或核酸成分,導致活性下降。
建議將試劑分裝成小份,僅取出一次實驗所需的量,剩余部分繼續保存。
3、干燥環境
保持試劑干燥,避免受潮或接觸水分,防止微生物污染或成分降解。
4、避光保存
某些試劑(如熒光標記物或光敏成分)對光敏感,需用錫箔紙包裹或存放在暗處。